極易發生的九種液相色譜儀出峰的異常問題

發布時間：2018-07-26 點擊次數：11201

日常工作中, 液相色譜儀的保養非常重要, 如要注意不要讓空氣進入輸液系統和高壓泵中, 儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器并更換溶液, 每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質, 完全溶解, 盡量減少對色譜柱的污染, 以延長色譜柱的使用壽命, 同時避免注射過濃的樣品溶液, 以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞；色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。

總結極易發生的九種液相色譜儀出峰的異常問題和解決方法如下：

極易發生的九種液相色譜儀出峰的異常問題、解決方法
序號	發生情況	產生的原因	解決方法
1	保留時間變化	1.柱溫變化	柱恒溫
		2.等度與梯度間未能充分平衡	至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
		3.緩沖液容量不夠	用>25mmol/L的緩沖液
		4.柱污染	每天沖洗柱
		5.柱內條件變化	穩定進樣條件,調節流動相
		6.柱快達到壽命	采用保護柱
2	保留時間縮短	1.流速增加	檢查泵,重新設定流速
		2.樣品超載	降低樣品量
		3.鍵合相流失	流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
		4.流動相組成變化	防止流動相蒸發或沉淀
		5.溫度增加	柱恒溫
3	保留時間延長	1.流速下降	管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡
		2.硅膠柱上活性點變化	用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
		3.鍵合相流失	流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
		4.流動相組成變化	防止流動相蒸發或沉淀
		5.溫度降低	柱恒溫
4	出現肩峰或分叉	1.樣品體積過大	用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
		2.樣品溶劑過強	采用較弱的樣品溶劑
		3.柱塌陷或形成短路通道	更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
		4.柱內燒結不銹鋼失效	更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
		5.進樣器損壞	更換進樣器轉子
		6.色譜柱被污染	先用純水反向沖洗柱子, 然后換成甲醇沖洗, 接著用甲醇、異丙醇)沖洗柱子
		7.柱頭填料塌陷	柱頭用甲醇沖洗干凈, 擦凈柱外壁的填料, 擰緊柱頭
5	鬼峰	1.進樣閥殘余峰	每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
		2.樣品中未知物	處理樣品
		3.柱未平衡	重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)
		4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)	每天新配,用抗氧化劑
		5.水污染(反相)	通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水
6	基線噪聲	1.氣泡(尖銳峰)	流動相脫氣,加柱后背壓
		2.污染(隨機噪聲)	清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
		3.檢測器燈連續噪聲	更換氘燈
		4.電干擾(偶然噪聲)	采用穩壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
		5.檢測器中有氣泡	流動相脫氣,加柱后背壓
7	峰拖尾或出現雙峰	1.柱超載	降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
		2.峰干擾	清潔樣品,調整流動相，使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子
		3.硅羥基作用加三乙胺	用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品
		4.柱內燒結不銹鋼失效	更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
		5.柱塌陷或形成短路通道	更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
		6.死體積或柱外體積過大	連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管
		7.柱效下降	用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱
		8.篩板堵塞或柱失效	反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子
8	峰展寬	1.進樣體積過大	用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
		2.在進樣閥中造成峰擴展	進樣前后排出氣泡以降低擴散
		3.數據系統采樣速率太慢	設定速率應是每峰大于10點
		4.檢測器時間常數過大	設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10%
		5.流動相粘度過高	增加柱溫,采用低粘度流動相
		6.檢測池體積過大	用小體積池,卸下熱交換器
		7.保留時間過長	等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
		8.柱外體積過大	將連接管徑和連接管長度降至最小
		9.樣品過載	進小濃度小體積樣品
9	峰面積重復性不佳	1.進樣閥漏液	更換進樣閥墊圈
9	峰面積重復性不佳	2.加樣針不到位	保證加樣針插到底,準確注射樣品溶液

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